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负链RNA病毒的反向遗传技术

(1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室 ，甘肃兰州 730046；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所
，西藏拉萨 850000)

摘 要：反向遗传技术是一种新的分子生物学技术，它在深入研究负链RNA病毒基因组结构和功能 ，探寻其基因组复制、转录和研发新型基因工程疫苗上发挥着重要的作用。文章介绍了分节与不分节负链RNA病毒的复制机理和特征
，论述了反向遗传学在研究这些病毒上的策略 、最新研究进展及其主要影响拯救效率的因素，进一步涉及了负链RNA病毒载体及其重组病毒的研究动态 。因此 ，通过反向遗传学
，人们将更加了解负链RNA病毒，为科学利用和有效控制该病毒奠定基础
。

关键词：反向遗传学；负链RNA病毒；病毒载体

反向遗传(Reverse genetic)技术作为一项新型技术 ，是从克隆的cDNA产生感染性RNA病毒的过程，实现了在cDNA 水平上对RNA病毒的操作
，从而为病毒的功能基因组研究提供了强有力的手段。相对来说，这项技术更易用于正链(Positive-strand)RNA病毒 ，从cDNA水平对其基因组进行操作
，拯救感染性病毒 。负链(Negative-strand，NS)RNA病毒 ，如埃博拉病毒
、马尔堡病毒、汉坦病毒 、拉沙病毒
、克里木-刚果出血热病毒等
，这些病原体由于存在独特的生物学特性，给病毒的拯救带来了一些困难 ，另外
，它们引起的疫病具有发病率高和死亡率高的特点，因此 ，对负链RNA病毒的研究就显得尤为重要
。目前已将反向遗传技术应用到该类病毒研究中去
，在这些病毒基因组的结构和功能，表达调控机制以及致病机理等方面 ，产生了深远影响。

1 负链RNA病毒的复制机理

负链RNA病毒有7个病毒科[1]，即弹状病毒科、副黏病毒科 、丝状病毒科
、博尔纳病毒科、正黏病毒科 、布尼病毒科和沙粒病毒科 。其中
，前4科病毒为不分节段的单股负链RNA病毒，后3科病毒为分节段的负链RNA病毒 ，分别含有6个～8个、3个
、2个负链RNA片段。

无论是分节(segmented negative-strand
，SNS)，还是不分节(non-segmented negative-strand ，NNS)负链RNA病毒
，都有共同的特性，它们都是包膜病毒 ，复制在胞质中进行
，产生的mRNA是不经剪接的
。正黏科病毒和博尔纳科病毒除外，它们转录和复制是在核仁中进行 ，有些mRNAs也需剪接。对传统mRNA正义链来说
，负链RNA病毒基因组和“互补 ”基因组的RNAs是用核蛋白(N或NP)衣壳来包裹，共同转录形成螺旋对称N-RNA模板 ，与不同量的聚合酶蛋白(副黏病毒、弹状病毒 、博尔纳病毒的大L蛋白和磷蛋白P，丝状病毒
、爱博拉病毒的L、VP30 、VP35
，沙粒病毒和布尼病毒的L蛋白，流感病毒的PA
、PB1、PB2)结合 ，构成一个最小的复制启动复合体(也称核糖核蛋白复合体
，RNP)，一旦功能性RNP复合体形成 ，转录 、复制
、病毒增殖也就开始启动 。

负链RNA病毒通过其病毒粒子表面的糖蛋白与宿主细胞的受体结合
，随后发生病毒的囊膜与胞浆膜(pH非依赖性途径)或内体膜(pH依赖途径)的融合，然后将病毒的核糖核蛋白(RNP)复合体释放到细胞质中 ，RNP复合体由病毒RNA、核蛋白(它包裹着病毒RNA)以及病毒聚合酶复合物组成
。在转录过程中
，首先由病毒携带的RNA-RNA聚合酶从病毒基因组(－RNA)转录出mRNA，再翻译产生所需要的酶和结构蛋白；在复制过程中 ，转录出与病毒基因组长度一致的＋RNA
，它可以作为模板合成病毒的RNA。大多数的负链RNA病毒是在被感染细胞的胞质中复制的，而波那病毒和正黏病毒则是在细胞核中复制的 ，因此对后者而言，RNP复合体以及新合成的NP和聚合酶蛋白必须运输到细胞核
，而新合成的RNP复合体则是又从细胞核中运输到细胞质中，以便新合成的RNP复合体在细胞质膜上或高尔基复合体膜上与病毒的结构蛋白装配在一起 ，随后释放出新合成的病毒 。

SNS-RNA病毒与NNS-RNA病毒明显区别是在它们的复制和mRNA转录机制上
，SNS病毒的每节代表一个独立的转录 、复制单位，每节3′末端
、5′末端的核苷酸都是保守的 ，显示出部分反向互补性
，这就导致了碱基对末端一起形成有功能的核心启动子，复制开始是从基因组(vRNA)和“互补
”基因组(cRNA)的3′端到产生全长复制子为止
。对NNS病毒来说 ，它们的转录开始仅仅在vRNA模板上
，不履行此规则的是沙粒病毒和部分的布尼病毒科病毒[2]。

2 反向遗传技术在负链RNA病毒上的研究策略

无论是来自cDNA，还是合成的RNA ，负链RNA病毒的拯救都不同于正链RNA病毒
，具体表现在：(1)负链病毒复制开始需要蛋白质从头合成，此过程是受它们自己依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase ， RdRp)影响；(2)被导入基因组和“互补”基因组RNA在作为功能模板链激发转录/复制之前，需要被病毒核蛋白衣壳包裹 。尽管如此
，人们采取了一些策略，仍然得到了一些负链RNA病毒的感染性分子克隆 ，如狂犬病病毒、牛瘟病毒 、新城疫病毒等
，并根据不同的研究目的，在DNA水平上进行体外操作 ，方法有基因敲除、基因缺失
、基因插入、基因置换以及构建嵌合病毒等
。

从cDNA克隆中得到具有感染性的负链RNA病毒
，需要建立一个微型复制系统，这样才能使新生的RNA衣壳化以及加工下游序列。在此系统中 ，常利用T7 RNA聚合酶
，以病毒基因组的cDNA为模板合成负链RNA病毒的RNA，然后再将这种人工病毒RNA转染已被辅助病毒感染过的真核细胞 ，即可得到含有人工RNA的病毒 。现使用这个系统已成功拯救了一些小基因组的报告基因
，如：仙台病毒(SEV)和呼吸道合胞病毒(RSV)
。

拯救全长感染性cDNA是很复杂，技术含量高 ，在获得感染性病毒介导的cDNA之前，需要构建NNS和SNS病毒的功能性小基因组[3]
，小基因组长度小，易于操作。在拯救中有些因素决定着拯救的效果与成败 。负链RNA病毒的非编码末端附近 ，通常带有一个单一报告基因开放阅读框
，在构建感染性重组病毒中，它们是非常有用的替代序列 ，影响着拯救病毒的成败；野型T7启动子控制着拯救的效率
，当删除T7启动序列，大多数病毒的拯救效率就会提高 ，如当丁型肝炎病毒核酶5′端自我切割产生准确3′病毒末端时
，就提高了拯救效率；一个更深的观点认为，大多数副黏病毒基因组或基因组类似物要具有功能 ，需要服从六法则
，大多数副黏病毒的有效复制只有在其核苷酸的总数可被6除尽时才能观察到，我们称之为“六法则 ”[4] ，即核酸蛋白与精确的6核苷酸发生相互作用。为了表达T7，一些科学家使用CMV增强子/启动子元件或鸡β-actin启动子控制的表达载体和稳定表达T7聚合酶的细胞系作为替换物
，但结果不理想
。最近，使用RNA聚合酶Ⅰ(PolⅡ) ，克服了T7启动系统的大多数缺点。Yanai H等[5]在反向遗传系统中使用RNA PolⅡ启动子
，研究Borna病毒小基因组表达的有效性，发现 ，在缺少SV40 T抗原的细胞中
，SV40核酸序列插入PolⅡ中能有效提高小基因组的复制 。

NNS和SNS病毒的拯救仍需以“互补”基因组构建体为基础，1994年 ，第一次成功拯救到了NS RNA病毒(棒状病毒 、狂犬病毒)
，该方法成功的关键因素在于能从cDNA克隆中合成正链“互补
”基因组RNA
。2001年，为了蛋白的表达和vRNA的转录 ，使用T7和PolⅠ驱动体系拯救了一个6节段的Thogoto病毒[6]。Flick R等[7]以小基因组拯救系统(一些布尼病毒如CCHF
、Uukuniemi、Hanaan和Borna病毒)为基础
，已广泛地使用PolⅠ系统，此系统对拯救RNA病毒是否有效仍需进一步证实 。

3 反向遗传系统的应用

3.1 NS RNA病毒

反向遗传学的研究 ，扩大了我们对RNA病毒分子生物学和发病机理的认识
。在控制病毒生命周期方面，小基因组的研究显得尤为重要
，主要有顺式反应元件的位置 、启动区的二级结构
、反式作用因子的功能区、基因组和“互补”基因组启动子的相对强度等。反向遗传分析已被成功地应用于RNA病毒顺式作用元件的确定和鉴定上，通过对NNS和SNS病毒小基因组的研究表明 ，控制转录 、复制
、衣壳化、包装的顺式作用元件位于3′端和5′端非编码核苷酸序列；流感病毒每个节段末端12个～13个核苷酸相互作用构成影响病毒增殖的基本核心启动子
，相邻非编码核苷酸具有最佳复制效率 。Li Z等[8]用反向遗传技术构建禽流感病毒重组体，一个是插入DKGX/22(无致病性)的一个基因 ，另外是插入DKGX/35(高度致病)7个基因片段
，接种鼠后，结果证实PB2上的第701位点的氨基酸在感染动物上是一个很重要的部位
。

由于缺乏对启动子结构知识 ，同源聚合酶对RNA选择/识别机制的研究就显得特别困难；启动子元件基本核苷酸的替换是否会破坏RNA的必要结构
，还是影响模板和聚合酶间优先核苷酸特殊反应，还不清楚。尽管存在这些不足 ，但通过对A型流感病毒启动子的具体分析
，基本了解了链内结构和启动病毒复制必需模板与聚合酶反应机理 。根据核苷酸替换机制，Flick和他的同事已经描述了一个独特的病毒RNA启动区“corkscrew ”构象 ，此构象包括远端的一个6碱基对杆构造和2个链内碱基配对茎-环结构，单替换和双互补诱变表现出结构不变的核苷是稀少的
，保持此区域结构完整性极为重要，这个不变核苷位于四核苷酸环结构上 ，可能有助于与聚合酶复合蛋白反应
，最近和以前的研究也证实了“corkscrew
”构象[9]，它比此病毒以前预想的启动模型要更为复杂 ，具有锅柄和叉结构
。

3.2 重组病毒载体

负链RNA病毒的特殊生物学特性使得它们最有希望用作载体：①它们不能通过DNA介导进行复制
，所以RNA病毒的基因组不会整合到宿主基因组中；②这类病毒的大多数成员都能产生很高的病毒滴度；③能容纳外源基因并高水平地表达蛋白或肽段；④负链RNA病毒做载体可以刺激宿主产生较强的细胞免疫和体液免疫。

重组病毒能稳定表达外源基因物质，由此产生了新的治疗观念和树立了疫病防治范例[10] 。副黏病毒和弹状病毒特别适合于外源遗传物质的稳定插入。这些病毒能够容纳 、表达上至5 kb大小外源遗传物质 ，这样就有可能制造二价苗
，甚至多价苗
。另外，经过其他基因终止和起始信号的导入 ，能相当容易地实现插入其他转录单位
，最终插入位点的精确选择控制着此插入基因的表达水平。重组病毒广泛用于载体，如麻疹疫苗病毒用于弱毒疫苗已经有长期的安全纪录 ，其他病毒如SEV和VSV疫苗病毒，被考虑对人类无致病性
，因为这些病毒的生命周期只局限于细胞质，因此 ，无携带危险
，现已作为载体而被广泛使用 。

3.3 重组病毒在疫苗上的研究

在重组病毒制造弱毒疫苗中，插入一些突变序列到疫苗或野型毒株中 ，可产生出一些疫苗[11]
，诱变多识别酶切位点成单一特殊酶识别的位点，引起毒性减弱 ，也可达到开发疫苗的目的
。一些弱毒重组病毒毒力与非结构干扰素颉颃基因的改变或删除相关
，这样改变的病毒因为减少或没有能力阻止宿主干扰素的影响，使其毒力减弱[12] ，基因的重排也能引起毒性减弱。Veits J等[13]通过应用反向遗传学构建能表达H5亚型禽流感病毒血凝素的新城疫病毒
，在它的融合基因和血凝素-神经氨酸酶基因之间插入一个开放阅读框，此阅读框能编码高致病禽流感病毒血凝素 ，结果是此重组体可表达出高水平的血凝素，由此认为
，此重组体可用作抗新城疫病毒和禽流感的二价疫苗，也可用作控制禽流感的标记疫苗 。Webster R G等[14]应用反向遗传学构建高活力的H5N3株禽流感病毒 ，当此株病毒灭火油乳疫苗中HA蛋白含量达到0.015 ng～1.2 ng
，可使鸭子产生对H5N1禽流感病毒有效保护的作用
。

3.4 重组病毒的其他应用

重组病毒也已用于其他领域，如预防
、治疗和研究。目前 ，研究正热的一个领域就是对一些NS RNA病毒抗癌潜能的研究
，特别是对VSV的研究，与其他病毒相比 ，它作为抗癌试剂存在一些优点
，如改造后含有调整免疫反应和自杀盒的基因，这样就增大了它们的抗癌能力[15] 。另外 ，也已开始应用假病毒替代高致病性病毒
，例如，删除VSV突变体的G基因 ，可检测此病毒受体结合状况，相似地
，一个带有汉坦或Seoul病毒包膜蛋白的假型VSV用作全病毒的有效替换物，为汉坦病毒的研究提出了一个安全可靠的分析方法[16]
。重组的副黏病毒可能在基因治疗上也有一定的研究价值 ，因为与传统的反转录病毒和腺病毒载体相比
，存在明显的几个优点，如在未分裂细胞(神经元细胞)中 ，SeV载体被用于有效表达外源基因[17]
，转移有复制能力SeV载体介导基因到鼠肺部上皮细胞后，仍能有效表达。

4 结语

由于反向遗传技术的应用 ，对RNA病毒的研究已呈指数上升
，为以前不可能研究的负链RNA病毒生物学和发病机理提供了新的思路，也打开了研制负链RNA病毒弱毒疫苗的大门 。然而 ，它也呈现出一些问题
，并产生了具有争论性的数据，其中一些与病毒或使用的实验系统不同有关 ，或可能是由于我们仍没有彻底了解机理有关，一些问题以前认为是已经得到了很好的阐述；但最近又出现了新问题、新情况
，有报道称，A型流感病毒的包装信号延长到此病毒的编码区 ，这就表明
，虽然NS RNA病毒能有效地促进转录 、复制、衣壳化
、包装[18]，但不能排除增强/调节这些功能的其他信号存在
。原则上 ，转录和复制是从3′端靠近启动子开始
，一项新的VSV研究则反驳了这样的观点，他们表示 ，没有前导RNA前面的转录
，转录开始就在内部N基因起始位点，等等。因此 ，本领域的研究仍面临着挑战
，还有大量的工作要做，有理由相信 ，伴随着反向遗传技术在负链RNA病毒上的不断深入研究，上述这些问题会得以科学解决
，控制负链RNA病毒不会很遥远 。

生物技术制药的目录

　现阶段我国的护理 教育 基本上是以职业技能教育为主,很多开设护理专业的医学类院校把护理教育课程设置的重点放在了护理生专业知识的学习以及专业技术的训练方面,这当然是毋庸置疑的。下面是我带来的关于护理 毕业 论文参考文献的内容，欢迎阅读参考!

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医学遗传学的图书目录

第1章 生物技术制药总论第1节基因工程与基因工程制药

步骤

一 、基因工程

二
、基因工程制药的基本步骤

三、基因工程制药的具体步骤

第2节细胞工程制药

一 、细胞工程

二
、细胞工程制药

第3节酶工程制药

一、酶与酶工程

二 、酶工程制药

第4节发酵工程制药

一
、发酵与发酵工程

二、发酵工程制药

第5节蛋白质工程制药

一 、蛋白质与蛋白质工程

二
、蛋白质工程制药

第6节生物医学工程与生物信息

工程

一、生物医学工程

二 、生物信息工程

思考题

参考文献

第2章 基因工程制药第1节基因克隆表达

一、大肠杆菌表达系统

二
、酵母表达系统

三、昆虫细胞表达系统

第2节各种产物表达形式采用的

分离纯化方法

一 、大肠杆菌细胞内不溶性表达产物

二
、分泌型的表达产物

三、大肠杆菌细胞内可溶性表达产物

四 、大肠杆菌细胞周质表达蛋白

第3节表达产物的活性
、安全性

评价、稳定性考察

一 、生物活性（效价）测定

二
、安全性评价

三、稳定性

四 、产品

思考题

参考文献

第3章 细胞工程制药第1节细胞
、细胞工程与细胞

工程制药

一、细胞

二 、细胞工程

三、细胞工程制药

第2节动物细胞工程制药

一
、动物细胞的全能性

二、动物细胞工程制药中的转基因

与细胞培养技术

第3节植物细胞工程制药

一 、植物细胞的特点

二
、植物细胞工程药物研究

三、植物细胞融合与核移植技术

四 、转基因植物药物技术

五
、植物细胞培养工程

六、植物细胞的染色体工程

第4节细胞工程制药的应用 、前景

和存在的问题

一
、临床用细胞工程药物

二、人源化抗体的研制与“分子药田”

工程

三 、细胞工程药物的安全性

思考题

参考文献

第4章 酶工程制药第1节酶工程制药概述

一
、酶及酶催化特性

二、影响酶催化反应的主要因素

三 、酶的分类

四、酶工程和酶工程制药

第2节酶工程制药技术

一
、药用酶的生产技术

二、药物的酶法生产技术

第3节酶工程制药的现状与前景

思考题

参考文献

第5章 发酵工程制药第1节发酵工程制药基础

一 、微生物发酵生产的药物

二
、发酵制药工业中的微生物

第2节微生物制药发酵工艺

第3节微生物发酵工艺过程的控制

思考题

参考文献

第6章 蛋白质工程制药第1节蛋白质工程制药的概念

一、蛋白质工程制药研究的核心内容

和基本概念及方法

二 、改造蛋白质的一些方法

第2节蛋白质工程制药方法

一
、随机诱变

二、体外重组

三 、蛋白质工程制药方法的常用目的

第3节蛋白质工程制药现状

一
、蛋白质定点突变改造

思考题

参考文献

第7章 核酸类药物第1节反义核酸药物

一、反义药物的作用机制

二 、反义药物的设计策略

三
、反义药物的作用特点

四、反义核酸药物的合成与纯化

第2节短小干扰RNA（siRNA）

一 、RNAi的作用机制

二、RNAi的特点

三
、siRNA的制备方法

第3节miRNA

一、miRNA的基本特征

二 、miRNA的作用机制

三
、siRNA和miRNA的异同

第4节核酸类药物的临床试验现状

与前景

一、反义核酸类药物的临床试验现状

与前景

二 、RNAi的临床试验现状与前景

思考题

参考文献

第8章 多肽类药物第1节多肽类药物的概念和优点

一
、多肽、多肽药物的概念

二 、多肽药物的优点

第2节多肽药物的制备

一
、固相合成法

二、液相合成法

三 、多肽合成仪法

四
、酶解法制备多肽

第3节多肽药物的稳定性、检测 、

制剂与给药途径

一、多肽药物的稳定性

二
、多肽类药物制剂的分析方法

三、多肽类药物的缓释制剂研究

四 、多肽药物的给药途径

第4节多肽药物的应用

一
、多肽疫苗

二、抗肿瘤多肽

三 、抗病毒多肽

四
、多肽导向药物

五、抗菌性活性肽

六 、细胞因子模拟肽

七
、用于心血管疾病的多肽

八、其他药用小肽

九 、诊断用多肽

思考题

参考文献

第9章 治疗性抗体药物第1节抗体概述

一
、抗体的基本结构

二、抗体的基因组成

三 、抗原识别特异性的产生

四、亲和力与结合力

五
、类别转换

六、药物代谢动力学

七 、效应功能

第2节治疗性小型化抗体

第3节单链抗体(ScFv)
、单域抗体

第4节重组人鼠嵌合单克隆抗体

第5节重组人源化单克隆抗体

一、人单克隆抗体

第6节抗体药物与化疗药物

的联合应用

思考题

参考文献

Ⅸ……………………Ⅹ第10章 治疗性细胞株第1节治疗性细胞株——干细胞

疗法

第2节树突状细胞共培养的细胞

因子

第3节治疗性克隆

第4节核移植与重编程

参考文献

第11章 细胞因子类药物第1节重组人干扰素

一 、概述

二
、IFN的性质、结构和功能

三 、IFN的生物学活性和作用机制

四
、IFN的基因工程制备

五、IFN的临床应用及不良反应

第2节重组人白细胞介素

一 、概述

二
、各类IL

第3节粒细胞集落刺激因子

一、结构与性质

二 、G?CSF、GM?CSF的临床应用

三
、G?CSF、GM?CSF的不良反应

四 、基因重组人G?CSF和GM?CSF

第4节促红细胞生成素

一
、EPO基因和分子结构

二、EPO的产生及性质

三 、重组人EPO的制备

四
、临床应用

五、EPO的不良反应

第5节组织型纤溶酶原激活剂

一 、概述

二
、性质、结构和功能

三 、生物学活性及作用机制

四
、基因工程制备t?PA

五、重组t?PA的临床应用

第6节肿瘤坏死因子

一 、概述

二、TNF的分子结构与功能

三
、TNF的生物活性和临床应用

四、TNF的制备

思考题

参考文献

第12章 基因治疗第1节基因治疗研究现状

一 、基因治疗的现状

二
、目前基因治疗存在的问题

第2节基因转移的方法

一、基因治疗的概念及步骤

二 、基因转移方法

第3节基因治疗的应用与安全性

一
、基因治疗的应用

二、基因治疗的安全性

思考题

参考文献

第13章 动物基因工程药物第1节动物细胞培养

一 、动物细胞培养的几个基本概念

二
、动物细胞培养的基本条件

三、动物细胞形态

四 、哺乳动物细胞冷冻保存

五
、动物细胞的解冻复苏

六、动物细胞的传代培养

第2节动物转基因技术

一 、动物细胞转基因技术

二、转基因动物制备技术

第3节动物反应器与动物基因

工程药物

一
、转基因动物细胞生物反应器

二、乳腺生物反应器

思考题

参考文献

第14章 植物基因工程药物第1节植物基因工程

一 、植物表达载体的构建

二
、植物转化

第2节植物基因工程药物

一、植物基因工程重组蛋白药物

二 、植物次生代谢工程

思考题

参考文献

第15章 分子靶向药物第1节概述

第2节细胞信号转导通路分子靶向

药物

一
、Ras/MAPK通道抑制剂

二、蛋白激酶C抑制剂

三 、环氧合酶?2选择性抑制剂

四
、端粒酶抑制因子

五、法基尼转移酶抑制剂

第3节原癌基因和抑癌基因

的分子靶向药物

一 、原癌基因表达的特点

二
、原癌基因的结构改变形式及其

表达激活

第4节细胞因子受体分子靶向药物

第5节抗肿瘤血管形成分子靶向药物

第6节小型化抗体靶向药物

第7节自杀基因

参考文献

第16章 融合蛋白药物第1节重组人肿瘤坏死因子受体—

Fc融合蛋白

一、肿瘤坏死因子

第2节重组抗肿瘤融合蛋白

一 、融合蛋白与肿瘤

二、融合蛋白与恶性肿瘤的演进

三
、融合蛋白在肿瘤治疗、预防研究

中的应用

第3节重组人血清清蛋白?干扰素

一 、干扰素的产生及其结构特点

二
、干扰素的治病原理

三、已上市的衍生干扰素产品

第4节重组人成纤维细胞生长因子

一 、αFGF及FGFR的结构和功能

二
、生物学功能

三、基因工程表达αFGF现状

四 、αFGF用于临床应注意的问题

第5节重组人粒细胞巨噬细胞

集落刺激因子

一
、人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

的分子生物学特征

二、人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

的临床应用

三 、人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

转基因表达研究

第6节白细胞介素

一
、种类和结构

二、生物学活性

三 、IL的功能

思考题

参考文献

Ⅺ……………………Ⅻ第17章 治疗性激素第1节胰岛素

一、胰岛素分子

二
、胰岛素受体与信号转导

三、重组DNA技术制备胰岛素产品

四 、用胰岛素合成细胞治疗糖尿病

第2节人生长激素

一
、生长激素释放因子与抑制因子

二、GH受体 、GH的生理作用与

GH的治疗作用

三
、重组huGH与垂体性矮小

四、huGH的代谢作用

五 、GH
、泌乳与排卵

第3节促性腺激素

一、重组促性腺激素

二 、促性腺激素在兽医学中的应用

三
、促性腺激素释放激素

第4节其他批准用于临床的重组

激素

一、重组人甲状旁腺激素

二 、重组降钙素

三、重组促甲状腺素

思考题

参考文献

第18章 血液制品和治疗性酶第1节血液代用品

一
、右旋糖酐

二、清蛋白

三 、明胶蛋白

四
、携氧血液替代品

第2节凝血因子和血友病

一、凝血因子Ⅷ

二 、凝血因子Ⅸ
、Ⅶa

第3节治疗用酶

一、抗凝血酶（AT）

二 、溶栓剂

三
、超氧化物歧化酶

四、其他治疗用酶

思考题

参考文献

第19章 疫苗技术和分子诊断技术第1节疫苗技术

一 、传统疫苗制剂

二
、基因工程疫苗技术与DNA疫苗

三、艾滋病疫苗

四 、肿瘤疫苗

五、佐剂技术及作用模式

第2节分子诊断技术

一
、分子诊断的概念及原理

二、分子诊断的常用技术方法

第3节分子诊断的临床应用

一 、分子诊断与遗传疾病

二
、分子诊断与传染性疾病

三、分子诊断与肿瘤

四 、分子诊断与个性化治疗

思考题

参考文献

第一章 医学遗传学概论/1

第一节 医学遗传学的概述/1

第二节 遗传病的概念/2

第三节 遗传病的主要类型/2

第四节 认识疾病遗传基础的方法/3

一
、群体普查法/3

二、系谱分析方法/3

三 、双生子方法/3

四
、染色体分析法/4

五、疾病组分分析/4

六 、关联分析法/4

七
、动物模型/4

第五节 医学遗传学分科及发展简史/4

第六节 医学遗传学研究热点及医学生

学习医学遗传学的目的/7

一、医学遗传学研究热点/7

二 、医学生学习医学遗传学的目的/7

第二章 遗传的细胞和分子基础/10

第一节 人类染色质和染色体/11

一、染色质/11

二
、染色体/12

第二节 细胞分裂/13

一、有丝分裂/14

二 、减数分裂/16

三
、配子发生和受精/18

第三节 真核细胞基因组和基因/19

一、真核细胞基因组的结构/19

二 、真核细胞基因的基本结构和功能/24

三
、基因表达/24

第四节 基因突变和突变类型/26

一、基因突变/26

二 、基因突变类型/26

第三章 单基因遗传病/32

第一节 遗传学基本定律/33

一
、分离律/33

二、自由组合律/36

三 、连锁与互换律/37

第二节 单基因病的遗传方式/39

一
、系谱与系谱分析/40

二、常染色体显性遗传/40

三 、常染色体隐性遗传/47

四、X连锁遗传/51

五
、Y连锁遗传/53

第三节 两种单基因病的传递/54

一、两种单基因病的独立传递/54

二 、两种单基因病的联合传递/55

第四节 线粒体遗传病/56

一
、线粒体DINA结构特点与遗传特征/56

二、常见线粒体遗传病/57

第四章 多基因遗传病/65

第一节 多基因遗传与数量性状/66

一 、质量性状与数量性状/66

二
、多基因遗传的特点/67

第二节 多基因遗传病的易患性与阈值模型/68

一、多基因遗传病的遗传基础/68

二 、多基因遗传病的易患性阈值模型/69

三
、遗传度/70

第三节 多基因遗传病的遗传特点与再发风险预测/71

一、多基因遗传病的遗传特点/71

二 、多基因遗传病的再发风险预测/71

第四节 多基因遗传病研究策略/75

一
、群体关联研究/75

二、家系连锁分析/75

三 、其他研究方法/76

第五章 染色体病/79

第一节 染色体的研究方法/80

一、染色体的形态学与显带技术/80

二
、细胞遗传学技术的进展/86

第二节 染色体的变异与多态性/88

一、概述/88

二 、染色体长度的差异/89

三
、随体/90

四、副缢痕/90

五 、Q
、G和C带的多态性/90

第三节 染色体畸变/91

一、染色体数目异常及产生机制/91

二 、染色体结构畸变/94

第四节 染色体异常的危害/104

一
、自然流产/104

二、出生缺陷/104

三 、常染色体异常综合征/105

四
、染色体微缺失(重复)综合征/111

五、遗传印记与染色体病/112

六 、性染色体异常综合征/112

七、染色体病复发风险的估计/125

第六章 群体遗传学/130

第一节 Hardy-Weinberg平衡定律及其应用/131

一
、基因频率和基因型频率/131

二、Hardy-Weinberg平衡定律/131

三 、Hardy-Weinberg平衡的应用/132

第二节 Hardy-Weinberg平衡的影响因素/135

一
、非随机婚配/135

二、选择/135

三 、突变/136

四
、小群体/136

五、基因流/137

第三节 近亲婚配/137

一 、近婚系数/137

二
、近亲婚配的危害/140

第四节 遗传负荷/141

第七章 分子病与遗传性代谢病/144

第一节 血红蛋白病/145

一、血红蛋白的分子结构和发育演变/145

二 、血红蛋白病/148

第二节 遗传性代谢病/155

一
、遗传性代谢缺陷产生机制/155

二、遗传性代谢病类型/156

第八章 肿瘤遗传学/171

第一节 肿瘤的细胞学基础/172

一 、肿瘤染色体数目异常/172

二、肿瘤染色体结构异常/172

三
、端粒和肿瘤发生/173

第二节 肿瘤的分子基础/173

一、癌基因/173

二 、肿瘤抑制基因/179

第三节 肿瘤发生的遗传因素证据/183

一
、肿瘤的遗传现象/183

二、遗传性肿瘤综合征/183

三 、遗传性肿瘤/184

四
、肿瘤的遗传易感性/184

第四节 肿瘤发生的遗传学说/185

一、单克隆起源学说/185

二 、Knudson假说/185

三
、肿瘤发生的多阶段遗传事件学说/186

第五节 肿瘤的分子诊断和基因治疗/188

一、肿瘤的分子诊断/188

二 、肿瘤的基因治疗/188

第九章 分子生物学技术/192

第一节 重组DNA技术/193

一
、重组DNA的两类重要酶/193

二、载体/196

三 、DNA克隆/200

第二节 基因文库/202

一、基因文库的建立/202

二
、基因文库的筛查/203

第三节 分子杂交/203

一、探针/204

二 、Southern印迹杂交/207

三
、Northern印迹杂交/209

四、Western印迹杂交/210

五 、斑点杂交/211

六
、等位基因特异性寡核苷酸杂交/211

第四节 聚合酶链反应/211

一、PCR的原理及步骤/21l

二 、PCR的应用/212

三
、PCR的优缺点/212

四、PCR相关技术/213

第五节 DNA测序/216

一 、化学裂解法/216

二
、双脱氧链末端终止法/217

三、DNA自动测序/218

第六节 转基因动物/219

第七节 生物芯片/220

第十章 遗传病的基因诊断和基因治疗/225

第一节 基因诊断/226

一 、基因诊断概念及特征/226

二、基因诊断常用技术/227

三
、基因诊断方法/228

第二节 基因治疗/233

一、基因治疗方法/233

二 、基因治疗策略/234

三
、基因治疗的程序/236

四、人类基因治疗的临床应用/241

五 、基因治疗面临的问题与挑战/243

参考答案/248

参考文献/251

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