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2.在"设置DD功能DD微信手麻工具"里.点击"开启".
3.打开工具.在"设置DD新消息提醒"里.前两个选项"设置"和"连接软件"均勾选"开启"(好多人就是这一步忘记做了)
4.打开某一个微信组.点击右上角.往下拉."消息免打扰"选项.勾选"关闭"(也就是要把"群消息的提示保持在开启"的状态.这样才能触系统发底层接口 。)
【央视新闻客户端】
解题思路：1 、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶） 、DNA连接酶、运载体．常用的运载体：质粒 、噬菌体的衍生物 、动植物病毒．
2、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂 ，形成黏性末端和平末端两种．
A 、基因工程中常用的工具酶有DNA连接酶 、限制性核酸内切酶，运载体不属于工具酶，A错误；
B、一种限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列 ，即具有特异性 ，B错误；
C、目的基因进入受体细胞需要检测和鉴定，不一定能成功实现表达 ，C错误；
D 、选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 ，并且遗传物质少，D正确．
故选：D．
,10,下列有关基因工程技术的叙述中 ，正确的是（）
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶 、连接酶和运载体
B．所有的限制酶只能识别同一种特定的核苷酸序列
C．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
D．选用细菌作为重组质粒的受体细胞的原因之一是细菌繁殖快
什么是DNA聚合酶？
分子克隆中常用的工具酶连接酶、T4 多核苷酸激酶 、碱性磷酸酶 、核酸酶、琼脂糖酶 、蛋白酶 、溶菌酶以及一些DNA 结合蛋白 。
分子克隆在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因 ，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体 ，通过转化与转导的方式 ，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体 ，可以得到插入DNA的许多拷贝 ，从而获得目的基因的扩增 。
工具酶：基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶 ，核酸酶和修饰酶五大类 。其中 ，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。
DNA聚合酶的种类很多，它们在细胞中的DNA复制过程中起着重要的作用 。DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ 、Ⅲ三类 。基因工程中很多步骤都需要DNA聚合酶催化DNA体外合成反应 ，这些酶作用时大多都需要模板 ，合成产物的序列与模板互补。基因工程常用的DNA聚合酶有：①大肠杆菌聚合酶Ⅰ(全酶)；②大肠杆菌聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段)；③T4噬菌体DNA聚合酶；④T7噬菌体聚合酶及经修饰的T7噬菌体聚合酶(测序酶)，⑤耐热DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)；⑥末端转移酶(末端脱氧核苷酸转移酶 ，也属DNA聚合酶)；⑦逆转录酶(依赖于RNA的DNA聚合酶)。
DNA聚合酶Ⅰ是基因工程中最常用的工具酶 。DNA聚合酶Ⅱ是一条120kD的肽链 ，催化5′→3′方向合成DNA，也具有3′→5′外切酶活性但没有5′→3′外切酶活性 。可能在当细胞DNA受到化学或物理损伤时 ，DNA聚合酶Ⅱ在修复过程中起特殊作用。DNA聚合酶Ⅲ全酶是一种大于250kD ，由多种亚基组成的蛋白质，它是不对称的二聚体 ，两个亚基可分别同时催化前导链(leadingstrand)及后随链的合成 。DNA聚合Ⅲ与DNA聚合酶Ⅰ相同 ，也具有3′→5′外切酶活性 。在DNA聚合作用中，核苷酸添加的错误率达1/1000。由于DNA聚合酶Ⅰ和DNA聚合酶Ⅲ全酶的3′→5′外切酶活性，可以终止核苷酸加入并除去错误核苷酸 ，然后可继续加入正确的核苷酸 ，可将错误率减少到百万分之一或更少 。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(全酶)：DNA聚合酶Ⅰ的分子量为109kD，是一条约1000个氨基酸残基的多肽链 。它具有三种活性：①5′→3′DNA聚合酶活性(能以单链DNA为模板 ，在3′-OH引物的引导下 ，按5′→3′方向，合成互补的DNA序列) ，②3′→5′外切核酸酶活性(能够去除延长的核酸链上的3′-OH末端上的核苷酸 ，可以沿3′→5′方向降解双链或单DNA链DNA，释放5′-单核苷酸) ，③5′→3′外切核酸酶活性(能从DNA链5′-OH末端降解双螺旋DNA的一条链 ，沿5′→3′方向，释放出单核苷酸或寡核苷酸)。DNA聚合酶Ⅰ的主要用途：①用切口平移方法标记DNA(可作杂交探针) ，②利用其5′→3′外切核酸酶活性降解寡核苷酸作为合成cDNA第二链的引物 ，③用于对DNA分子的3′突出尾进行末端标记，用于DNA序列分析 。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断(KLENOW)：KLENOW片断是用枯草杆菌蛋白酶裂解完整的DNA聚合酶Ⅰ产生，或通过克隆技术而获得 。此酶是单一多肽链 ，分子量76kD。它具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶活性 ，而无5′→3′外切酶活性 。Klenow片段的主要用途：①补平限制性内切酶切割DNA产生的3′凹端；②用［32P］dBTP补平3′凹端，对DNA片段进行末端标记；③对带3′突出端的DNA进行末端标记；④在cDNA克隆中 ，用于合成cDNA第二链；⑤在体外诱变中 ，用于从单链模板合成双链DNA；⑥应用双脱氧链末端终止法进行DNA测序 。
T4噬菌体DNA聚合酶：T4噬菌体DNA聚合酶(分子为114kD)，与Klenow片断相似的是：都具有5′→3′聚合酶活性及3′→5′外切核酸酶活性。其3′→5′外切酶活性对单链DNA的作用比对双链DNA的作用更强。它的外切核酸酶活性比Klenow片段要强200倍 。由于它不从单链DNA模板上置换寡核酸引物 ，因此在体外诱变反应中 ，它的效率比Klenow片段更强 。它的主要用途：①补平或标记限制性内切酶消化DNA后产生的3′凹端，②对带有3′突出端的DNA分子进行末端标记；③标记用作探针的DNA片段。④将双链DNA的末端转化成为平端 。⑤使结合于单链DNA模板上的诱变寡核苷酸引物得到延伸 。
Ts噬菌体DNA聚合酶及由此改造的测序酶：T7噬菌体感染大肠杆菌诱生的DNA聚合酶 ，是两种紧密结合的蛋白质的复合体。这两种蛋白质一种是T7噬菌体基因5蛋白 ，另一种是宿主蛋白的硫氧还原蛋白 。该酶是所有已知DNA聚合酶中持续合成能力最强的一个，它所催化合成的DNA的平均长度要比其他DNA聚合酶催化合成的DNA平均长度大得多 。它的3′→5′外切核酸酶活性约为Klenow片段的1000倍。它没有5′→3′外切酶核酸酸活性 。它的主要用途：①用于拷贝长段模板的引物延伸反应 ，②通过补平或交换(置换)反应进行快速末端标记 。
T7噬菌体聚合酶中基因5蛋白中一个结构区 ，与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的DNA结合处及聚合结构区高度同源。这一结合及聚合结构区包含了该蛋白近羟基端的序列，而其氨其端则具有强有力的3′→5′外切核酸活性 。用氧作还原剂把该酶分子与氧及二价铁离子处理可使酶3′→5′外切核酸酶活性灭活而保留其聚合酶活性 。改造后的酶的持续合成能力很强，是双脱氧链终止法对长段DNA进行测序的理想用酶。后来由UnitedStatesBiochemical公司以测序酶(sequenase)作为商品名投放市场 ，现在已通过基因工程手段生产出一种改进的测序酶(2.0版) ，它完全丧失了外切核酸酶活性。
耐热DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)：这是一种耐热的依赖DNA的DNA聚合酶(分子量65kD，原是从嗜热的水生菌Thermusaquaticus中纯化来的 ，现在以基因工程生产并出售(AmpliTaqTM) 。这些酶具有依赖于聚合物5′→3′外切核酸酶活性 。用途：①用于DNA测序 ，②用于聚合酶链式反应(PCR)对DNA片段进行体外扩增。
末端转移酶：从动物胸腺和骨髓中提取 。此酶催化脱氧核苷酸添加到DNA分别的3′-OH末端上，催化作用不要求有模板 ，但需Co2+的存在 。末端转移酶可作一群DNA分子的3′-OH末端接上寡dA或dC ，而给另一群DNA分子的3′-OH末端接上寡dT或dG，混合这两群分子 ，即可使同聚物尾部退火形成环状分子。用途：①给载体或cDNA加上互补的同聚尾 ，②用于DNA片段3′末端的放射同位素标记 。
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